काइनेज: Difference between revisions

[[File:Active site of Dihydroxyacetone Kinase.png|thumb|upright=1.25|एक गैर-हाइड्रोलाइज़ेबल [[एडेनोसाइन ट्रायफ़ोस्फेट|एटीपी]] अनुरूप (एएमपी-पीएनपी) के साथ भीति में [[डायहाइड्रॉक्सीसिटोन]] काइनेज है। पीडीबी आईडी से निर्देशांक:1UN9 है।<ref>{{cite journal | vauthors = Siebold C, Arnold I, Garcia-Alles LF, Baumann U, HErnia B | title = Citrobacter freundii dihydroxyacetone kinase की क्रिस्टल संरचना से आठ-फंसे हुए अल्फा-हेलिकल बैरल AKTP-बाइंडिंग डोमेन का पता चलता है| journal = The Journal of Biological Chemistry | volume = 278 | issue = 48 | pages = 48236–48244 | date = November 2003 | pmid = 12966101 | doi = 10.1074/jbc.M305942200 | doi-access = free }}</ref>]]जैव रसायन में, '''काइनेज''' ({{IPAc-en|ˈ|k|aɪ|n|eɪ|s|,_|ˈ|k|ɪ|n|eɪ|s|,_|-|eɪ|z}})<ref>{{cite Dictionary.com|kinase|access-date=2022-06-18}}</ref> एक [[एंजाइम|किण्वक]] है जो उच्च-ऊर्जा[[ फास्फेट ]]दान करने वाले अणुओं से विशिष्ट [[सब्सट्रेट (जैव रसायन)|अवस्तरों]] तक फॉस्फेट समूहों के स्थानान्तरण को उत्प्रेरित करता है। इस प्रक्रिया को [[फास्फारिलीकरण]] के रूप में जाना जाता है, जहां उच्च-ऊर्जा एडेनोसिन ट्राइफॉस्फेट अणु [[सब्सट्रेट (जीव विज्ञान)|अवस्तर]] अणुओं को फॉस्फेट समूह दान करता है। यह [[ट्रान्सएस्टरीफिकेशन]] एक फॉस्फोराइलेटेड अवस्तर और [[एडेनोसिन डिपोस्फेट|एडीपी]] का उत्पादन करता है। इसके विपरीत, इसे [[dephosphorylation|विफॉस्फोरिलन]] के रूप में संदर्भित किया जाता है जब फॉस्फोराइलेटेड अवस्तर एक फॉस्फेट समूह दान करता है और एडीपी एक फॉस्फेट समूह प्राप्त करता है (डीफॉस्फोराइलेटेड अवस्तर और एटीपी के उच्च ऊर्जा अणु का उत्पादन करता है)। ये दो प्रक्रियाएं, फॉस्फोरिलीकरण और विफॉस्फोरिलन [[ग्लाइकोलाइसिस|ग्लाइकोलिसिस]] के पर्यन्त चार बार होती हैं।<ref name="pmid12471243">{{cite journal | vauthors = Manning G, Whyte DB, Martinez R, Hunter T, Sudarsanam S | title = प्रोटीन किनेज मानव जीनोम का पूरक है| journal = Science | volume = 298 | issue = 5600 | pages = 1912–1934 | date = December 2002 | pmid = 12471243 | doi = 10.1126/science.1075762 | s2cid = 26554314 | bibcode = 2002Sci...298.1912M }}</ref><ref>{{cite web|title=काइनेज|url=http://www.thefreedictionary.com/काइनेजs}} TheFreeDictionary.com</ref><ref>{{cite web |url=http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/1997/illpres/history.html |title=एटीपी से संबंधित रसायन विज्ञान से एटीपी अनुसंधान मील के पत्थर का इतिहास|publisher= Nobelprize.org}}</ref>

काइनेज [[फॉस्फोट्रांसफेरेज]]़ के बड़े समूह का हिस्सा हैं। काइनेज को [[phosphorylase|फ़ॉस्फ़ोरिलेज़]] के साथ भ्रमित नहीं होना चाहिए, जो एक स्वीकर्ता को अकार्बनिक [[फॉस्फेट]] समूहों को जोड़ने के लिए उत्प्रेरित करता है, न ही फॉस्फेटेज़ के साथ, जो फॉस्फेट समूहों (विफॉस्फोरिलन) को हटाते हैं। एक अणु की फास्फारिलीकरण अवस्था, चाहे वह [[प्रोटीन]], [[लिपिड|वसा]] या [[कार्बोहाइड्रेट]] हो, उसकी गतिविधि, प्रतिक्रियाशीलता और अन्य अणुओं को बांधने की क्षमता को प्रभावित कर सकती है। इसलिए, काइनेज चयापचय, [[सेल सिग्नलिंग|कोशिका संकेतन]], प्रोटीन विनियमन, कोशिकीय मार्ग, स्रावी प्रक्रियाओं और कई अन्य कोशिकीय मार्गों में महत्वपूर्ण हैं, जो उन्हें शरीर विज्ञान के लिए बहुत महत्वपूर्ण बनाता है।

[[File:Basic phosphorylation reaction.png|thumb|upright=3|सामान्य प्रतिक्रिया जो काइनेज द्वारा उत्प्रेरित होती है।]]काइनेज एक उच्च ऊर्जा अणु (जैसे एटीपी) से फॉस्फेट की मात्रा को उनके अवस्तर अणुओं में स्थानांतरित करने में मध्यस्थता करते हैं, जैसा कि नीचे दिए गए चित्र में देखा गया है। इस प्रतिक्रिया को स्थिर करने के लिए काइनेज की आवश्यकता होती है क्योंकि [[ फॉस्फॉनहाइड्राइड |फॉस्फॉनहाइड्राइड]] बंधन में उच्च स्तर की ऊर्जा होती है। काइनेज अपने सक्रिय स्थलों के भीतर अपने अवस्तरों और फॉस्फोरिल समूहों को ठीक से उन्मुख करते हैं, जिससे प्रतिक्रिया की दर बढ़ जाती है। इसके अतिरिक्त, वे सामान्यतः धन आवेशित किए गए [[ एमिनो एसिड |अमीनो अम्ल]] अवशेषों का उपयोग करते हैं, जो ऋणआवेशित किए गए फॉस्फेट समूहों के साथ अन्योन्यक्रिया करके इलेक्ट्रोस्टैटिक रूप से संक्रमण की स्थिति को स्थिर करते हैं। वैकल्पिक रूप से, कुछ काइनेज फॉस्फेट समूहों को समन्वयित करने के लिए अपनी सक्रिय स्थलों में बाध्य धातु सहकारकों का उपयोग करते हैं। प्रोटीन काइनेज को उत्प्रेरक रूप से सक्रिय (विहित) या स्यूडोकाइनेज के रूप में वर्गीकृत किया जा सकता है, जो एक या अधिक उत्प्रेरक अमीनो अम्ल के विकासवादी हानि को दर्शाता है जो एटीपी को स्थिति या हाइड्रोलाइज करता है।<ref name="pmid24818526">{{cite journal | vauthors = Reiterer V, Eyers PA, Farhan H | title = Day of the dead: pseudokinases and pseudophosphatases in physiology and disease | journal = Trends in Cell Biology | volume = 24 | issue = 9 | pages = 489–505 | date = September 2014 | pmid = 24818526 | doi = 10.1016/j.tcb.2014.03.008 }}</ref> हालांकि, संकेतन बहिर्गत और रोग प्रासंगिकता के संदर्भ में, काइनेज और स्यूडोकाइनेज दोनों ही मानव कोशिकाओं में महत्वपूर्ण संकेतन मॉड्यूलेटर हैं, जो काइनेज को बहुत महत्वपूर्ण औषधि लक्ष्य बनाते हैं।<ref>Foulkes DM, Byrne DP and Eyers PA (2017) Pseudokinases: update on their functions and evaluation as new drug targets. Future Med Chem. 9(2):245-265</ref>

संकेतों को प्रसारित करने और कोशिकाओं में जटिल प्रक्रियाओं को विनियमित करने के लिए काइनेज का बड़े पैमाने पर उपयोग किया जाता है। अणुओं का फॉस्फोरिलीकरण उनकी गतिविधि को बढ़ा या बाधित कर सकता है और अन्य अणुओं के साथ अन्योन्यक्रिया करने की उनकी क्षमता को नियंत्रित कर सकता है। फॉस्फोरिल समूहों को जोड़ने और हटाने से कोशिका को नियंत्रण का साधन मिलता है क्योंकि विभिन्न काइनेज विभिन्न स्थितियों या संकेतों पर प्रतिक्रिया कर सकते हैं। काइनेज में उत्परिवर्तन जो कार्य में हानि या कार्य में लाभ का कारण बनते हैं, कैंसर का कारण बन सकते हैं<ref>{{cite news| vauthors = Samarasinghe B |title=कैंसर के लक्षण 1|url=http://blogs.scientificamerican.com/guest-blog/2013/09/18/hallmarks-of-cancer-1-self-sufficiency-in-growth-signals|newspaper=Scientific American}}</ref> और मनुष्यों में रोग, जिनमें कुछ प्रकार के [[ लेकिमिया | श्वेतरक्तता]] और [[न्यूरोब्लास्टोमा|तंत्रिका कोशिकाप्रसू अर्बुद]], [[ ग्लयोब्लास्टोमा |तंत्रीबंधप्रसू अर्बुद]],<ref>{{cite journal | vauthors = Bleeker FE, Lamba S, Zanon C, Molenaar RJ, Hulsebos TJ, Troost D, van Tilborg AA, Vandertop WP, Leenstra S, van Noorden CJ, Bardelli A | display-authors = 6 | title = ग्लियोब्लास्टोमा में किनेसेस की पारस्परिक रूपरेखा| journal = BMC Cancer | volume = 14 | pages = 718 | date = September 2014 | pmid = 25256166 | pmc = 4192443 | doi = 10.1186/1471-2407-14-718 }}</ref> [[स्पिनोसेरेबेलर गतिभंग|सुषुम्ना अनुमस्तिष्क गतिविभ्रम]] (प्रकार 14), [[एग्माग्लोबुलिनमिया|अगामाग्लोबुलिनरक्तता]] के रूप और कई अन्य सम्मिलित हैं।<ref>{{cite journal | vauthors = Lahiry P, Torkamani A, Schork NJ, Hegele RA | title = Kinase mutations in human disease: interpreting genotype-phenotype relationships | journal = Nature Reviews. Genetics | volume = 11 | issue = 1 | pages = 60–74 | date = January 2010 | pmid = 20019687 | doi = 10.1038/nrg2707 | s2cid = 37398118 }}</ref>

एटीपी का उपयोग करके किसी अन्य प्रोटीन के फास्फारिलीकरण को उत्प्रेरित करने वाले पहले प्रोटीन को 1954 में यूजीन पी. कैनेडी द्वारा देखा गया था, उस समय उन्होंने एक यकृत किण्वक का वर्णन किया था जो कैसीन के फास्फारिलीकरण को उत्प्रेरित करता था।{{cn|date=March 2023}} 1956 में, एडमंड एच. फिशर और एडविन जी. क्रेब्स ने पाया कि फॉस्फोरिलेज़ a और फॉस्फोरिलेज़ b के मध्य अंतर-रूपांतरण फास्फारिलीकरण और विफॉस्फोरिलन द्वारा मध्यस्थ था।<ref>{{cite journal | vauthors = Krebs EG | title = प्रोटीन फास्फारिलीकरण पर ऐतिहासिक दृष्टिकोण और प्रोटीन किनेसेस के लिए एक वर्गीकरण प्रणाली| journal = Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences | volume = 302 | issue = 1108 | pages = 3–11 | date = July 1983 | pmid = 6137005 | doi = 10.1098/rstb.1983.0033 | doi-access = free | bibcode = 1983RSPTB.302....3K }}</ref> जिस काइनेज ने फॉस्फोरिल समूह को फॉस्फोरिलेज़ b में स्थानांतरित कर दिया, उसे फॉस्फोरिलेज़ a में परिवर्तित कर दिया, उसे फॉस्फोरिलेज़ काइनेज नाम दिया गया। वर्षों बाद, काइनेज कैस्केड के पहले उदाहरण की पहचान की गई, जिससे प्रोटीन काइनेज a (PKA) फॉस्फोराइलेट फॉस्फोराइलेज काइनेज होता है। उसी समय, यह पाया गया कि पीकेए ने [[ग्लाइकोजन]] सिंथेज़ को बाधित किया, जो फास्फारिलीकरण घटना का पहला उदाहरण था जिसके परिणामस्वरूप अवरोध हुआ। 1969 में, लेस्टर रीड ने पाया कि फॉस्फोराइलेशन द्वारा [[पाइरूवेट डिहाइड्रोजनेज]] को निष्क्रिय कर दिया गया था, और यह खोज पहला संकेत था कि फास्फारिलीकरण ग्लाइकोजन चयापचय के अतिरिक्त अन्य अन्य चयापचय मार्गों में विनियमन के साधन के रूप में कार्य कर सकता है। उसी वर्ष, टॉम लैंगन ने पाया कि पीकेए फॉस्फोराइलेट्स हिस्टोन एच1, जिसने सुझाव दिया कि फास्फारिलीकरण नॉनजाइमेटिक प्रोटीन को नियंत्रित कर सकता है। 1970 के दशक में Ca2+/शांतोडुलिन-आश्रित प्रोटीन काइनेज की खोज और यह पता लगाना सम्मिलित था कि प्रोटीन को एक से अधिक अमीनो अम्ल अवशेषों पर फास्फोराइलेट किया जा सकता है। 1990 के दशक को "प्रोटीन काइनेज कैस्केड का दशक" के रूप में वर्णित किया जा सकता है। इस समय के पर्यन्त, एमएपीके/ईआरके मार्ग, जेएके, [[janus kinase|काइनेज]] (प्रोटीन टाइरोसिन काइनेज का एक समूह) और पीआईपी3-आश्रित काइनेज कैस्केड की खोज की गई।<ref name="origins">{{cite journal | vauthors = Corbellino M, Poirel L, Aubin JT, Paulli M, Magrini U, Bestetti G, Galli M, Parravicini C | display-authors = 6 | title = The role of human herpesvirus 8 and Epstein-Barr virus in the pathogenesis of giant lymph node hyperplasia (Castleman's disease) | journal = Clinical Infectious Diseases | volume = 22 | issue = 6 | pages = 1120–1121 | date = June 1996 | pmid = 8783733 | doi = 10.1093/clinids/22.6.1120 | doi-access = free }}</ref>

 

काइनेज को उन अवस्तरों के आधार पर व्यापक समूहों में वर्गीकृत किया जाता है जिन पर वे कार्य करते हैं: प्रोटीन काइनेज, वसा काइनेज, कार्बोहाइड्रेट काइनेज है। काइनेज विभिन्न प्रकार की प्रजातियों में पाए जा सकते हैं, जीवाणु से लेकर फफूंद तक, कीड़े से लेकर स्तनधारी तक है।<ref>{{cite journal | vauthors = Scheeff ED, Bourne PE | title = प्रोटीन किनेज-जैसे सुपरफैमिली का संरचनात्मक विकास| journal = PLOS Computational Biology | volume = 1 | issue = 5 | pages = e49 | date = October 2005 | pmid = 16244704 | pmc = 1261164 | doi = 10.1371/journal.pcbi.0010049 | bibcode = 2005PLSCB...1...49S }}</ref> मनुष्यों में पाँच सौ से अधिक विभिन्न काइनेज की पहचान की गई है।<ref name="pmid12471243" />उनकी विविधता और संकेतन में उनकी भूमिका उन्हें अध्ययन का एक रोचक उद्देश्य बनाती है। कई अन्य काइनेज छोटे अणुओं जैसे कि वसा, कार्बोहाइड्रेट, अमीनो अम्ल और [[न्यूक्लियोटाइड]] पर या तो संकेत देने के लिए या उन्हें चयापचय मार्गों के लिए तैयार करने के लिए कार्य करते हैं। विशिष्ट काइनेज का नाम प्रायः उनके अवस्तरों के नाम पर रखा जाता है। प्रोटीन काइनेज में प्रायः कई अवस्तर होते हैं और प्रोटीन एक से अधिक विशिष्ट काइनेज के लिए अवस्तरों के रूप में कार्य कर सकते हैं। इस कारण से प्रोटीन काइनेज का नाम उनकी गतिविधि को नियंत्रित करने के आधार पर रखा गया है (अर्थात शांतोडुलिन-आश्रित प्रोटीन काइनेज)। कभी-कभी उन्हें आगे श्रेणियों में विभाजित किया जाता है क्योंकि कई आइसोएंजाइमेटिक रूप होते हैं। उदाहरण के लिए, प्रकार I और प्रकार II चक्रीय-एएमपी आश्रित प्रोटीन काइनेज में समान उत्प्रेरक उप-इकाई होते हैं लेकिन अलग-अलग नियामक उप-इकाई होते हैं जो चक्रीय एएमपी को बांधते हैं।<ref name="krebs lec">{{cite journal | vauthors = Krebs EG | title = The phosphorylation of proteins: a major mechanism for biological regulation. Fourteenth Sir Frederick Gowland Hopkins memorial lecture | journal = Biochemical Society Transactions | volume = 13 | issue = 5 | pages = 813–820 | date = October 1985 | pmid = 2998902 | doi = 10.1042/bst0130813 }}</ref>

 

[[File:signal transduction pathways.png|thumb|upright=2|right|सिग्नल ट्रांसडक्शन पाथवे का अवलोकन। इसमें सम्मिलित कई प्रोटीन काइनेज हैं, जिनमें प्रोटीन काइनेज (जैसे [[MAPK|एमएपीके]] और जानूस काइनेज) और वसा काइनेज (जैसे [[PI3K|पीआई3के]]) सम्मिलित हैं।]]

प्रोटीन काइनेज प्रोटीन पर उनके सेरीन, थ्रियोनीन, टायरोसीन या हिस्टडीन अवशेषों पर फॉस्फेटन करके कार्य करते हैं। फास्फारिलीकरण प्रोटीन के कार्य को कई तरह से संशोधित कर सकता है। यह एक प्रोटीन की गतिविधि को बढ़ा या घटा सकता है, इसे स्थिर कर सकता है या इसे विनाश के लिए चिह्नित कर सकता है, इसे एक विशिष्ट कोशिकीय कोष्ठ के भीतर स्थानीयकृत कर सकता है और यह अन्य प्रोटीनों के साथ अपनी अन्योन्यक्रिया प्रारंभ या बाधित कर सकता है। प्रोटीन काइनेज सभी काइनेज का बहुमत बनाते हैं और इनका व्यापक रूप से अध्ययन किया जाता है।<ref>{{cite journal | vauthors = Manning G, Whyte DB, Martinez R, Hunter T, Sudarsanam S | title = प्रोटीन किनेज मानव जीनोम का पूरक है| journal = Science | volume = 298 | issue = 5600 | pages = 1912–1934 | date = December 2002 | pmid = 12471243 | doi = 10.1126/science.1075762 | s2cid = 26554314 | bibcode = 2002Sci...298.1912M }}</ref> ये काइनेज, फॉस्फेटेस के संयोजन के साथ, प्रोटीन और किण्वक विनियमन के साथ-साथ कोशिका में संकेतन में एक प्रमुख भूमिका निभाते हैं।

जब एक कोशिका जैविक विनियमन प्राप्त करने के विभिन्न तरीकों के विषय में विचार करती है तो भ्रम की एक सामान्य स्थिति उत्पन्न होती है। सहसंयोजक संशोधनों के अनगिनत उदाहरण हैं जो कोशिकीय प्रोटीन से गुजर सकते हैं; हालाँकि, फास्फारिलीकरण कुछ प्रतिवर्ती सहसंयोजक संशोधनों में से एक है। इससे यह तर्क मिला कि प्रोटीन का फास्फारिलीकरण नियामक है। प्रोटीन कार्य को विनियमित करने की क्षमता बहुत अधिक है, क्योंकि एलोस्टेरिक नियंत्रण द्वारा प्रदान किए गए विनियमन के अतिरिक्त प्रोटीन को सहसंयोजक रूप से संशोधित करने के कई तरीके हैं। अपने हॉपकिंस स्मारक व्याख्यान में, [[एडविन क्रेब्स]] ने जोर देकर कहा कि एलोस्टेरिक नियंत्रण कोशिका के भीतर से उत्पन्न होने वाले संकेतों पर प्रतिक्रिया करने के लिए विकसित हुआ, जबकि फास्फारिलीकरण कोशिका के बाहर संकेतों पर प्रतिक्रिया करने के लिए विकसित हुआ। यह विचार इस तथ्य के अनुरूप है कि प्रोटीन का फास्फारिलीकरण प्राकेंद्रकी कोशिकाओं की तुलना में सुकेंद्रकी कोशिकाओं में अधिक बार होता है क्योंकि अधिक जटिल कोशिका प्रकार संकेतों की एक विस्तृत श्रृंखला पर प्रतिक्रिया करने के लिए विकसित हुआ है।<ref name="krebs lec"/>

=== साइक्लिनआश्रित काइनेज ===

साइक्लिन आश्रित काइनेज (CDK) [[कोशिका चक्र]] के नियमन में सम्मिलित कई अलग-अलग काइनेज का एक समूह है। वे अपने सेरीन या थ्रेओनीन अवशेषों पर अन्य प्रोटीनों को फास्फोराइलेट करते हैं, लेकिन सक्रिय होने के लिए सीडीके को पहले साइक्लिन प्रोटीन से बांधना होगा।<ref name="cdk review">{{cite journal | vauthors = Harper JW, Adams PD | title = साइक्लिन-आश्रित किनेसेस| journal = Chemical Reviews | volume = 101 | issue = 8 | pages = 2511–2526 | date = August 2001 | pmid = 11749386 | doi = 10.1021/cr0001030 }}</ref> विशिष्ट सीडीके और साइक्लिन के विभिन्न संयोजन कोशिका चक्र के विभिन्न भागों को चिन्हित करते हैं। इसके अतिरिक्त, सीडीके की फास्फारिलीकरण स्थिति भी उनकी गतिविधि के लिए महत्वपूर्ण है, क्योंकि वे अन्य काइनेज (जैसे [[सीडीके-सक्रिय करने वाले किनेज|सीडीके-सक्रिय करने वाले काइनेज]]) और [[ फास्फेटेजों |फॉस्फेटेस]] (जैसे [[सीडीसी25]]) द्वारा विनियमन के अधीन हैं।<ref>{{cite book| vauthors = Karp G |title=Cell and molecular biology : concepts and experiments|year=2010|publisher=John Wiley|location=Hoboken, NJ|isbn=9780470483374|edition=6th}}</ref> एक बार जब सीडीके सक्रिय हो जाते हैं, तो वे अपनी गतिविधि को बदलने के लिए अन्य प्रोटीनों को फॉस्फोराइलेट करते हैं, जिससे कोशिका चक्र के अगले चरण के लिए आवश्यक घटनाएं होती हैं। जबकि वे कोशिका चक्र नियंत्रण में अपने कार्य के लिए सबसे अधिक जाने जाते हैं, सीडीके की प्रतिलेखन, चयापचय और अन्य कोशिकीय घटनाओं में भी भूमिका होती है।<ref>{{cite journal | vauthors = Lim S, Kaldis P | title = Cdks, cyclins and CKIs: roles beyond cell cycle regulation | journal = Development | volume = 140 | issue = 15 | pages = 3079–3093 | date = August 2013 | pmid = 23861057 | doi = 10.1242/dev.091744 | doi-access = free }}</ref>

कोशिका विभाजन को नियंत्रित करने में उनकी महत्वपूर्ण भूमिका के कारण, सीडीके में उत्परिवर्तन प्रायः कैंसरयुक्त कोशिकाओं में पाए जाते हैं। इन उत्परिवर्तनों से कोशिकाओं की अनियंत्रित वृद्धि होती है, जहां वे तीव्रता से सम्पूर्ण कोशिका चक्र से बार-बार गुजरती हैं।<ref name="can">{{cite journal | vauthors = Canavese M, Santo L, Raje N | title = Cyclin dependent kinases in cancer: potential for therapeutic intervention | journal = Cancer Biology & Therapy | volume = 13 | issue = 7 | pages = 451–457 | date = May 2012 | pmid = 22361734 | doi = 10.4161/cbt.19589 | doi-access = free }}</ref> सीडीके उत्परिवर्तन [[ लिंफोमा | लिंफोमा]], [[स्तन कैंसर]], [[अग्न्याशय]] [[ फोडा |ट्यूमर]] और फेफड़ों के कैंसर में पाए जा सकते हैं। इसलिए, सीडीके के अवरोधकों को कुछ प्रकार के कैंसर के उपचार के रूप में विकसित किया गया है।<ref name="can" />

{{main|माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन काइनेज}}