प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी

काउंटरकरंट क्रोमैटोग्राफी (सीसीसी, काउंटर-करंट क्रोमैटोग्राफी भी) तरल-तरल क्रोमैटोग्राफी का एक रूप है जो एक तरल स्टेशनरी चरण (रसायन विज्ञान) का उपयोग करता है जो अणुओं की जड़ता द्वारा आयोजित किया जाता है जो एक अपकेंद्रित्र के केंद्र की ओर बढ़ते हुए स्थिर चरण की रचना करता है। केन्द्रापसारक बल के लिए और मिश्रण के रासायनिक घटकों को अलग करने, पहचानने और मापने के लिए प्रयोग किया जाता है। अपने व्यापक अर्थों में, प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी में संबंधित तरल क्रोमाटोग्राफी तकनीकों का एक संग्रह शामिल है जो ठोस समर्थन के बिना दो मिश्रणीयता तरल चरणों को नियोजित करता है। दो तरल चरण एक दूसरे के संपर्क में आते हैं क्योंकि कम से कम एक चरण क्रोमैटोग्राफी कॉलम, एक खोखले ट्यूब या चैनलों से जुड़े कक्षों की एक श्रृंखला के माध्यम से पंप किया जाता है, जिसमें दोनों चरण होते हैं। परिणामी गतिशील मिश्रण और निपटान क्रिया घटकों को दो चरणों में उनके संबंधित घुलनशीलता से अलग करने की अनुमति देती है। वांछित पृथक्करण के लिए उचित चयनात्मकता प्रदान करने के लिए कम से कम दो अमिश्रणीय तरल पदार्थों से युक्त दो-चरण विलायक प्रणालियों की एक विस्तृत विविधता को नियोजित किया जा सकता है। कुछ प्रकार की प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी, जैसे कि दोहरी प्रवाह सीसीसी, एक वास्तविक प्रतिधारा प्रक्रिया की सुविधा देती है जहां दो अमिश्रणीय चरण एक दूसरे के पीछे प्रवाहित होते हैं और स्तंभ के विपरीत छोर से बाहर निकलते हैं। अधिक बार, हालांकि, एक तरल स्थिर चरण के रूप में कार्य करता है और स्तंभ में रखा जाता है जबकि मोबाइल चरण इसके माध्यम से पंप किया जाता है। तरल स्थिर चरण को गुरुत्वाकर्षण या अणुओं की जड़ता द्वारा स्थिर किया जाता है, जो केन्द्रापसारक बल के कारण एक अपकेंद्रित्र के केंद्र की ओर बढ़ते हुए स्थिर चरण की रचना करता है। गुरुत्वाकर्षण विधि का एक उदाहरण ड्रॉपलेट काउंटर करंट क्रोमैटोग्राफी (DCCC) कहा जाता है। ऐसे दो तरीके हैं जिनके द्वारा केन्द्रापसारक बल द्वारा स्थिर चरण को बनाए रखा जाता है: हाइड्रोस्टैटिक और हाइड्रोडाइनमिक ।  द्रवस्थैतिक  विधि में, स्तंभ को केंद्रीय अक्ष के चारों ओर घुमाया जाता है। हाइड्रोस्टैटिक उपकरणों का विपणन केन्द्रापसारक विभाजन क्रोमैटोग्राफी (सीपीसी) के नाम से किया जाता है। हाइड्रोडायनामिक उपकरणों को अक्सर उच्च-गति या उच्च-प्रदर्शन प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी (क्रमशः एचएससीसीसी और एचपीसीसीसी) उपकरणों के रूप में विपणन किया जाता है जो स्तंभ में स्थिर चरण को बनाए रखने के लिए पेचदार कुंडली में आर्किमिडीज के पेंच बल पर भरोसा करते हैं। CCC प्रणाली के घटक अधिकांश तरल क्रोमैटोग्राफी कॉन्फ़िगरेशन के समान होते हैं, जैसे उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (HPLC)। एक या एक से अधिक पंप चरणों को स्तंभ तक पहुंचाते हैं जो सीसीसी उपकरण ही है। नमूने एक स्वचालित या मैन्युअल सिरिंज से भरे नमूना लूप के माध्यम से कॉलम में पेश किए जाते हैं। बहिर्वाह की निगरानी विभिन्न डिटेक्टरों जैसे पराबैंगनी-दृश्यमान स्पेक्ट्रोस्कोपी या मास स्पेक्ट्रोमेट्री से की जाती है। पंप, सीसीसी उपकरण, नमूना इंजेक्शन, और पहचान का संचालन मैन्युअल रूप से या माइक्रोप्रोसेसर के साथ नियंत्रित किया जा सकता है।

इतिहास
आधुनिक प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी सिद्धांत और व्यवहार का पूर्ववर्ती प्रतिधारा वितरण (सीसीडी) था। सीसीडी के सिद्धांत का वर्णन 1930 के दशक में रान्डेल और लॉन्गटिन द्वारा किया गया था। आर्चर मार्टिन और रिचर्ड लॉरेंस मिलिंगटन सिन्ज ने 1940 के दशक के दौरान इस पद्धति को और विकसित किया। अंत में, लाइमैन सी. क्रेग ने 1944 में क्रेग प्रतिधारा वितरण उपकरण की शुरुआत की जिसने सीसीडी को प्रयोगशाला के काम के लिए व्यावहारिक बना दिया। सीसीडी का उपयोग कई दशकों तक विभिन्न प्रकार के उपयोगी यौगिकों को अलग करने के लिए किया गया था।

समर्थन मुक्त कॉलम क्रोमैटोग्राफी
मानक स्तंभ क्रोमैटोग्राफी में एक ठोस स्थिर चरण और एक तरल मोबाइल चरण होता है, जबकि गैस वर्णलेखन (जीसी) ठोस समर्थन और गैसीय मोबाइल चरण पर ठोस या तरल स्थिर चरण का उपयोग करती है। इसके विपरीत, तरल-तरल क्रोमैटोग्राफी में, मोबाइल और स्थिर दोनों चरण तरल होते हैं। हालाँकि, यह विपरीत उतना कठोर नहीं है जितना पहली नज़र में लगता है। उल्टे-चरण क्रोमैटोग्राफी में, उदाहरण के लिए, स्थिर चरण को एक तरल के रूप में माना जा सकता है जो एक सूक्ष्म सामग्री के लिए रासायनिक बंधन द्वारा स्थिर होता है। सूक्ष्म झरझरा सिलिका जेल ठोस समर्थन। प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी में केन्द्रापसारक या गुरुत्वाकर्षण बल स्थिर तरल परत को स्थिर करते हैं। ठोस समर्थन को समाप्त करके, स्तंभ पर विश्लेषण के स्थायी सोखने से बचा जाता है, और विश्लेषण की उच्च वसूली प्राप्त की जा सकती है। प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी उपकरण आसानी से मोबाइल और स्थिर चरणों को बदलकर सामान्य चरण क्रोमैटोग्राफी और उलट-चरण क्रोमैटोग्राफी के बीच स्विच किया जाता है। स्तंभ क्रोमैटोग्राफी के साथ, जुदाई क्षमता व्यावसायिक रूप से उपलब्ध स्थिर चरण मीडिया और इसकी विशेष विशेषताओं द्वारा सीमित है। प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी में लगभग किसी भी अमिश्रणीय विलयन का उपयोग किया जा सकता है, बशर्ते कि स्थिर चरण को सफलतापूर्वक बनाए रखा जा सके।

सॉल्वेंट की लागत भी आमतौर पर एचपीएलसी की तुलना में कम होती है। स्तंभ क्रोमैटोग्राफी की तुलना में, प्रवाह और कुल विलायक उपयोग अधिकांश प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी अलगाव में आधा और दसवां तक ​​भी कम हो सकता है। साथ ही, स्टेशनरी फेज मीडिया की खरीद और निपटान की लागत समाप्त हो जाती है। प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी का एक अन्य लाभ यह है कि प्रयोगशाला में किए गए प्रयोगों को औद्योगिक मात्रा में बढ़ाया जा सकता है। जब गैस क्रोमैटोग्राफी या एचपीएलसी बड़ी मात्रा में किया जाता है, तो सतह-से-आयतन अनुपात और प्रवाह गतिकी के मुद्दों के कारण संकल्प खो जाता है; इससे बचा जाता है जब दोनों चरण तरल होते हैं।

सीसीसी पृथक्करण प्रक्रिया को तीन चरणों में घटित होने के बारे में सोचा जा सकता है: दो चरणों का मिश्रण, निपटान और पृथक्करण (हालांकि वे अक्सर लगातार होते हैं)। उनके बीच इंटरफेसियल क्षेत्र को अधिकतम करने और बड़े पैमाने पर स्थानांतरण को बढ़ाने के लिए चरणों का जोरदार मिश्रण महत्वपूर्ण है। विश्लेषण अपने विभाजन गुणांक के अनुसार चरणों के बीच वितरित करेगा जिसे वितरण गुणांक, वितरण स्थिरांक या विभाजन अनुपात भी कहा जाता है और इसे P, K, D, K द्वारा दर्शाया जाता है।c, या केD. एक विशेष द्विध्रुवीय विलायक प्रणाली में एक विश्लेषण के लिए विभाजन गुणांक उपकरण की मात्रा, प्रवाह दर, स्थिर चरण प्रतिधारण मात्रा अनुपात और स्थिर चरण को स्थिर करने के लिए आवश्यक जी-बल से स्वतंत्र है। स्थिर चरण प्रतिधारण की डिग्री एक महत्वपूर्ण पैरामीटर है। सामान्य कारक जो स्थिर चरण प्रतिधारण को प्रभावित करते हैं, प्रवाह दर, द्विध्रुवीय विलायक प्रणाली की विलायक संरचना और जी-बल हैं। स्थिर चरण अवधारण को स्थिर चरण आयतन अवधारण अनुपात (Sf) द्वारा दर्शाया जाता है जो उपकरण के कुल आयतन से विभाजित स्थिर चरण का आयतन है। बसने का समय विलायक प्रणाली और नमूना मैट्रिक्स की एक संपत्ति है, जो दोनों स्थिर चरण अवधारण को बहुत प्रभावित करते हैं। अधिकांश प्रक्रिया रसायनज्ञों के लिए, प्रतिधारा शब्द का अर्थ विपरीत दिशाओं में चलने वाले दो अमिश्रणीय तरल पदार्थों से है, जैसा कि आमतौर पर बड़े केन्द्रापसारक चिमटा इकाइयों में होता है। दोहरे प्रवाह (नीचे देखें) सीसीसी के अपवाद के साथ, संचालन के अधिकांश प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी मोड में एक स्थिर चरण और एक मोबाइल चरण होता है। इस स्थिति में भी, साधन स्तंभ के भीतर प्रतिधारा प्रवाह होता है। कई शोधकर्ताओं ने CCC और CPC दोनों का नाम बदलकर तरल-तरल क्रोमैटोग्राफी करने का प्रस्ताव दिया है, लेकिन दूसरों को लगता है कि प्रतिधारा शब्द अपने आप में एक मिथ्या नाम है। स्तंभ क्रोमैटोग्राफी और एचपीएलसी के विपरीत, प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी ऑपरेटर कॉलम वॉल्यूम के सापेक्ष बड़ी मात्रा में इंजेक्ट कर सकते हैं। आमतौर पर कॉइल वॉल्यूम का 5 से 10% इंजेक्ट किया जा सकता है। कुछ मामलों में इसे कॉइल वॉल्यूम के 15 से 20% तक बढ़ाया जा सकता है। आमतौर पर, अधिकांश आधुनिक वाणिज्यिक सीसीसी और सीपीसी 5 से 40 ग्राम/एल क्षमता इंजेक्ट कर सकते हैं। सीमा इतनी बड़ी है, यहां तक ​​कि एक विशिष्ट उपकरण के लिए, अकेले सभी उपकरण विकल्पों को छोड़ दें, क्योंकि लक्ष्य के प्रकार, मैट्रिक्स और उपलब्ध द्विध्रुवीय विलायक बहुत भिन्न होते हैं। लगभग 10 g/L एक अधिक विशिष्ट मान होगा, जिसे अधिकांश अनुप्रयोग आधार मान के रूप में उपयोग कर सकते हैं।

प्रतिधारा पृथक्करण वांछित पृथक्करण के लिए एक उपयुक्त द्विध्रुवीय विलायक प्रणाली को चुनने के साथ शुरू होता है। एन-हेक्सेन (या हेपटैन ), एथिल एसीटेट, मेथनॉल और पानी के विभिन्न अनुपातों में संयोजन सहित सीसीसी व्यवसायी के लिए बाइफैसिक सॉल्वेंट मिश्रण की एक विस्तृत श्रृंखला उपलब्ध है। इस मूल विलायक प्रणाली को कभी-कभी HEMWat विलायक प्रणाली के रूप में संदर्भित किया जाता है। सॉल्वेंट सिस्टम का चुनाव सीसीसी साहित्य के अवलोकन द्वारा निर्देशित किया जा सकता है। इष्टतम विलायक प्रणाली निर्धारित करने के लिए पतली परत क्रोमैटोग्राफी की परिचित तकनीक को भी नियोजित किया जा सकता है। परिवारों में सॉल्वेंट सिस्टम के संगठन ने सॉल्वेंट सिस्टम के चुनाव को भी बहुत आसान बना दिया है। एक फ्लास्क विभाजन प्रयोग के साथ विलायक प्रणाली का परीक्षण किया जा सकता है। विभाजन प्रयोग से मापा गया विभाजन गुणांक यौगिक के क्षालन व्यवहार को इंगित करेगा। आमतौर पर, एक सॉल्वेंट सिस्टम चुनना वांछनीय होता है, जहां टारगेट कंपाउंड का विभाजन गुणांक 0.25 और 8 के बीच होता है। ऐतिहासिक रूप से, यह सोचा गया था कि कोई वाणिज्यिक प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफ आयनिक तरल पदार्थों की उच्च चिपचिपाहट का सामना नहीं कर सकता। हालांकि, आधुनिक उपकरण जो 30 से 70+% आयनिक तरल पदार्थ (और संभावित रूप से 100% आयनिक तरल, यदि दोनों चरण उपयुक्त रूप से अनुकूलित आयनिक तरल पदार्थ हैं) को समायोजित कर सकते हैं, उपलब्ध हो गए हैं। आयनिक तरल पदार्थों को ध्रुवीय / गैर-ध्रुवीय कार्बनिक, अचिरल और चिरलिटी (रसायन विज्ञान) यौगिकों, जैव-अणुओं और अकार्बनिक पृथक्करणों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, क्योंकि आयनिक तरल पदार्थों को असाधारण सॉल्वेंसी और विशिष्टता के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। द्विध्रुवीय विलायक प्रणाली को चुने जाने के बाद एक अलग फ़नल में तैयार और संतुलित किया जाता है। इस कदम को विलायक प्रणाली का पूर्व-संतुलन कहा जाता है। दो चरण अलग हो गए हैं। फिर स्तंभ को एक पंप के साथ स्थिर से भर दिया जाता है। अगला, स्तंभ एक संतुलन स्थिति सेट करता है, जैसे वांछित रोटेशन गति, और मोबाइल चरण स्तंभ के माध्यम से पंप किया जाता है। मोबाइल चरण स्थिर चरण के एक हिस्से को तब तक विस्थापित करता है जब तक स्तंभ संतुलन प्राप्त नहीं हो जाता है और मोबाइल चरण स्तंभ से बाहर निकल जाता है। नमूना स्तंभ संतुलन चरण के दौरान या संतुलन पूरा होने के बाद किसी भी समय कॉलम में पेश किया जा सकता है। eluant की मात्रा स्तंभ में मोबाइल चरण की मात्रा से अधिक हो जाने के बाद, नमूना घटक elute होने लगेंगे। एकता के एक विभाजन गुणांक के साथ यौगिक तब समाप्त हो जाएंगे जब इंजेक्शन के समय से मोबाइल चरण का एक कॉलम वॉल्यूम कॉलम के माध्यम से पारित हो गया हो। परिणामों के क्रोमैटोग्राफिक संकल्प को बढ़ाने में मदद करने के लिए यौगिक को दूसरे स्थिर चरण में पेश किया जा सकता है। टारगेट कंपाउंड (एस) को हटा दिए जाने के बाद प्रवाह को रोक दिया जाता है या कॉलम के माध्यम से स्थिर चरण को पंप करके कॉलम को बाहर निकाल दिया जाता है। प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी के एक प्रमुख अनुप्रयोग का एक उदाहरण एक अत्यंत जटिल मैट्रिक्स लेना है जैसे कि पौधे का अर्क, ध्यान से चयनित सॉल्वेंट सिस्टम के साथ काउंटरकरंट क्रोमैटोग्राफी पृथक्करण करना और सभी नमूने को पुनर्प्राप्त करने के लिए कॉलम को बाहर निकालना। मूल जटिल मैट्रिक्स को असतत संकीर्ण रासायनिक ध्रुवीकरण बैंड में विभाजित किया गया होगा, जिसे बाद में रासायनिक संरचना या बायोएक्टिविटी के लिए स्वीकार किया जा सकता है। अन्य क्रोमैटोग्राफिक और गैर क्रोमैटोग्राफिक तकनीकों के संयोजन के साथ एक या एक से अधिक प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी पृथक्करण करने से अत्यधिक जटिल मेट्रिसेस की रचनात्मक पहचान में तेजी से प्रगति की संभावना है।

बूंद सीसीसी
छोटी बूंद प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी (DCCC) को 1970 में तनीमुरा, पिसानो, इटो और बोमन द्वारा पेश किया गया था। डीसीसीसी स्थिर चरण के माध्यम से मोबाइल चरण को स्थानांतरित करने के लिए केवल गुरुत्वाकर्षण का उपयोग करता है जो श्रृंखला में जुड़े लंबे ऊर्ध्वाधर ट्यूबों में आयोजित होता है। अवरोही मोड में, सघन मोबाइल चरण और नमूने की बूंदों को केवल गुरुत्वाकर्षण का उपयोग करके लाइटर स्थिर चरण के स्तंभों के माध्यम से गिरने दिया जाता है। यदि एक कम-सघन मोबाइल चरण का उपयोग किया जाता है तो यह स्थिर चरण के माध्यम से ऊपर उठेगा; इसे आरोही मोड कहा जाता है। एक कॉलम से एलुएंट को दूसरे में स्थानांतरित किया जाता है; जितने अधिक स्तंभों का उपयोग किया जाता है, उतने अधिक सैद्धांतिक प्लेट प्राप्त किए जा सकते हैं। DCCC ने प्राकृतिक उत्पाद पृथक्करण के साथ कुछ सफलता प्राप्त की, लेकिन उच्च-गति प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी के तेजी से विकास द्वारा बड़े पैमाने पर ग्रहण किया गया। डीसीसीसी की मुख्य सीमा यह है कि प्रवाह दर कम है, और अधिकांश बाइनरी सॉल्वेंट सिस्टम के लिए खराब मिश्रण हासिल किया जाता है।

हाइड्रोडायनामिक सीसीसी
सीसीसी का आधुनिक युग डॉ. योइचिरो इटो द्वारा ग्रहों के अपकेंद्रित्र के विकास के साथ शुरू हुआ, जिसे पहली बार 1966 में एक बंद पेचदार ट्यूब के रूप में पेश किया गया था, जिसे ग्रहीय अक्ष पर घुमाया गया था और सूर्य की धुरी पर घुमाया गया था। एक फ्लो-थ्रू मॉडल बाद में विकसित किया गया था और नई तकनीक को 1970 में प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी कहा गया था। क्लोरोफार्म :  एसीटिक अम्ल : 0.1 एम जलीय हाइड्रोक्लोरिक एसिड (2:2:1 v/v) सॉल्वेंट सिस्टम में 1-फ्लोरो-2,4-डाइनिट्रोबेंजीन  एमिनो एसिड  के परीक्षण मिश्रण को नियोजित करके तकनीक को और विकसित किया गया था। उपकरण को इंजीनियर करने के लिए बहुत विकास की आवश्यकता थी ताकि आवश्यक ग्रहों की गति को बनाए रखा जा सके, जबकि चरणों को कुंडल (एस) के माध्यम से पंप किया जा रहा था। दो अक्षों (सिंक्रोनस या नॉन-सिंक्रोनस) के सापेक्ष रोटेशन, कॉइल के माध्यम से प्रवाह की दिशा और रोटर कोणों जैसे पैरामीटर की जांच की गई।

उच्च गति
1982 तक तकनीक पर्याप्त रूप से उन्नत हो गई थी, जिसे तकनीक को हाई-स्पीड काउंटरकरंट क्रोमैटोग्राफी (HSCCC) कहा जाता था। पीटर कार्मेसी ने शुरू में पीसी इंक. इटो मल्टीलेयर कॉइल सेपरेटर/एक्सट्रैक्टर का व्यावसायीकरण किया, जिसमें एक सिंगल बोबिन (जिस पर कॉइल लिपटी हुई है) और एक काउंटरबैलेंस का उपयोग किया गया, साथ ही फ्लाइंग लीड्स का एक सेट जो अटेरन  को जोड़ने वाले टयूबिंग हैं। डॉ. वाल्टर कॉनवे और अन्य ने बाद में बोबिन डिजाइन विकसित किया, ताकि कई कॉइल, यहां तक ​​कि विभिन्न ट्यूबिंग आकारों के कॉइल को भी एक बॉबिन पर रखा जा सके। एडवर्ड चाउ ने बाद में Pharmatech CCC के रूप में एक ट्रिपल बॉबिन डिज़ाइन विकसित किया और उसका व्यवसायीकरण किया, जिसमें तीन बॉबिन के बीच लीड के लिए एक डी-ट्विस्ट तंत्र था। 1993 में जारी क्वात्रो सीसीसी ने एक नई मिरर इमेज, ट्विन बॉबिन डिज़ाइन का उपयोग करके व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उपकरणों को और विकसित किया, जिसे मल्टीपल बॉबिन के बीच Pharmatech के डी-ट्विस्ट तंत्र की आवश्यकता नहीं थी, इसलिए अभी भी एक ही उपकरण पर कई बॉबिन को समायोजित किया जा सकता है। हाइड्रोडायनामिक सीसीसी अब प्रति उपकरण 4 कॉइल तक उपलब्ध है। ये कॉइल पॉलीटेट्राफ्लोरोएथिलीन, पॉलिथर ईथर कीटोन, पोलीविनीलीडेंस फ्लोराइड या स्टेनलेस स्टील टयूबिंग में हो सकते हैं। 2डी सीसीसी (नीचे देखें) की सुविधा के लिए 2, 3 या 4 कॉइल सभी एक ही बोर के हो सकते हैं। कॉइल को लंबा करने और क्षमता बढ़ाने के लिए कॉइल को श्रृंखला में जोड़ा जा सकता है, या कॉइल को समानांतर में जोड़ा जा सकता है ताकि 2, 3 या 4 पृथक्करण एक साथ किए जा सकें। कॉइल एक उपकरण पर विभिन्न आकारों के भी हो सकते हैं, एक उपकरण पर 1 से 6 मिमी तक, इस प्रकार एक उपकरण को प्रति दिन मिलीग्राम से किलो तक अनुकूलित करने की अनुमति मिलती है। हाल ही में इंस्ट्रूमेंट डेरिवेटिव्स को विभिन्न हाइड्रोडायनामिक सीसीसी डिजाइनों के लिए फ्लाइंग लीड्स के बजाय कस्टम या मानक विकल्पों के रूप में रोटेटिंग सील्स के साथ पेश किया गया है।

उच्च-प्रदर्शन
सीसीसी उपकरण के संचालन सिद्धांत में एक स्तंभ की आवश्यकता होती है जिसमें बोबिन के चारों ओर कुंडलित ट्यूब होती है। बोबिन को एक डबल-एक्सिस गाइरेटरी मोशन (एक कारडायोड ) में घुमाया जाता है, जो प्रत्येक घुमाव के दौरान स्तंभ पर कार्य करने के लिए चर जी-बल का कारण बनता है। यह गति स्तंभ को एक विभाजन चरण प्रति क्रांति और नमूने के घटकों को दो अमिश्रणीय तरल चरणों के बीच उनके विभाजन गुणांक के कारण स्तंभ में अलग देखने का कारण बनती है। उच्च-प्रदर्शन प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी (HPCCC) HSCCC की तरह ही काम करती है। एक सात-वर्षीय अनुसंधान और विकास प्रक्रिया ने HSCCC उपकरणों के 80 ग्राम की तुलना में 240 ग्राम उत्पन्न करने वाले HPCCC उपकरणों का उत्पादन किया। जी-फोर्स में यह वृद्धि और स्तंभ के बड़े बोर ने बेहतर मोबाइल चरण प्रवाह दर और उच्च स्थिर चरण अवधारण के कारण थ्रूपुट में दस गुना वृद्धि को सक्षम किया है। प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी एक प्रारंभिक तरल क्रोमैटोग्राफी तकनीक है, हालांकि उच्च-जी एचपीसीसीसी उपकरणों के आगमन के साथ अब कुछ मिलीग्राम के रूप में नमूना लोडिंग के साथ उपकरणों को संचालित करना संभव है, जबकि पिछले सैकड़ों मिलीग्राम आवश्यक थे। इस तकनीक के लिए प्रमुख अनुप्रयोग क्षेत्रों में प्राकृतिक उत्पाद शुद्धिकरण और औषधि विकास शामिल हैं।

हाइड्रोस्टैटिक सीसीसी
हाइड्रोस्टैटिक सीसीसी या केन्द्रापसारक विभाजन क्रोमैटोग्राफी (सीपीसी) का आविष्कार 1980 के दशक में जापानी कंपनी सैंकी इंजीनियरिंग लिमिटेड द्वारा किया गया था, जिसके अध्यक्ष कनिची नुनोगाकी थे। 1990 के दशक के अंत से सीपीसी फ्रांस में बड़े पैमाने पर विकसित किया गया है। फ्रांस में, उन्होंने शुरू में सैंकी द्वारा शुरू की गई स्टैक्ड डिस्क अवधारणा को अनुकूलित किया। हाल ही में, फ़्रांस और यूके में, गैर-स्टैक्ड डिस्क सीपीसी कॉन्फ़िगरेशन को पॉलीटेट्राफ्लोरोएथिलीन, स्टेनलेस स्टील या टाइटेनियम रोटर्स के साथ विकसित किया गया है। इन्हें मूल अवधारणा के स्टैक्ड डिस्क के बीच संभावित रिसाव को दूर करने और अच्छे निर्माण अभ्यास के लिए भाप की सफाई की अनुमति देने के लिए डिज़ाइन किया गया है। विभिन्न रोटर सामग्रियों में 100 मिलीलीटर से लेकर 12 लीटर तक की मात्रा उपलब्ध है। 25 लीटर रोटर सीपीसी में टाइटेनियम रोटर है। इस तकनीक को कभी-कभी तेज सीपीसी या उच्च-प्रदर्शन सीपीसी के नाम से बेचा जाता है।

बोध
केन्द्रापसारक विभाजन क्रोमैटोग्राफ उपकरण एक अद्वितीय रोटर के साथ गठित होता है जिसमें कॉलम होता है। यह रोटर अपनी केंद्रीय धुरी पर घूमता है (जबकि HSCCC स्तंभ अपनी ग्रहीय धुरी पर घूमता है और साथ ही साथ एक अन्य सौर अक्ष के बारे में विलक्षण रूप से घूमता है)। कम कंपन और शोर के साथ, सीपीसी 500 से 2000 आरपीएम तक एक विशिष्ट रोटेशन स्पीड रेंज प्रदान करता है। हाइड्रोडायनामिक सीसीसी के विपरीत, रोटेशन की गति स्थिर चरण के अवधारण मात्रा अनुपात के सीधे आनुपातिक नहीं है। DCCC की तरह, CPC को अवरोही या आरोही मोड में संचालित किया जा सकता है, जहाँ दिशा गुरुत्वाकर्षण के बजाय रोटर द्वारा उत्पन्न बल के सापेक्ष होती है। बड़े कक्षों और चैनलों के साथ पुन: डिज़ाइन किए गए CPC कॉलम को केन्द्रापसारक विभाजन निष्कर्षण (CPE) नाम दिया गया है। सीपीई डिजाइन में तेज प्रवाह दर और बढ़ी हुई कॉलम लोडिंग हासिल की जा सकती है।

लाभ
सीपीसी तेजी से बैच-उत्पादन के लिए विश्लेषणात्मक उपकरण (कुछ मिलीलीटर) से औद्योगिक उपकरण (कई लीटर) तक प्रत्यक्ष स्केल-अप प्रदान करता है। सीपीसी जलीय दो-चरण विलायक प्रणालियों को समायोजित करने के लिए विशेष रूप से अनुकूल लगता है। आम तौर पर, सीपीसी उपकरण सॉल्वेंट सिस्टम को बनाए रख सकते हैं जो चरणों के बीच घनत्व में छोटे अंतर के कारण हाइड्रोडायनामिक उपकरण में अच्छी तरह से बनाए नहीं रखा जाता है। यह सीपीसी इंस्ट्रूमेंटेशन के विकास के लिए प्रवाह पैटर्न की कल्पना करने में बहुत मददगार रहा है जो सीपीसी कक्ष में एक एसिंक्रोनस कैमरा और सीपीसी रोटर द्वारा ट्रिगर किए गए स्ट्रोबोस्कोप के साथ मिश्रण और बसने को जन्म देता है।

ऑपरेशन के मोड
वैज्ञानिक की विशेष पृथक्करण आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए उपरोक्त हाइड्रोडायनामिक और हाइड्रोस्टैटिक उपकरणों को विभिन्न तरीकों या संचालन के तरीकों में नियोजित किया जा सकता है। प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी तकनीक की ताकत और क्षमता का लाभ उठाने के लिए ऑपरेशन के कई तरीके तैयार किए गए हैं। आम तौर पर, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उपकरणों के साथ निम्न मोड का प्रदर्शन किया जा सकता है।

सामान्य-चरण
कॉलम में अधिक ध्रुवीय स्थिर चरण बनाए रखने के साथ, मोबाइल चरण के रूप में स्तंभ के माध्यम से गैर-जलीय या द्विध्रुवीय विलायक प्रणाली के चरण को पंप करके सामान्य चरण क्षालन प्राप्त किया जाता है। के मूल नामकरण का कारण प्रासंगिक है। पेपर क्रोमैटोग्राफी के मूल स्थिर चरणों के रूप में डायटोमेसियस पृथ्वी (प्राकृतिक सूक्ष्म झरझरा सिलिका) जैसे अधिक कुशल सामग्रियों द्वारा प्रतिस्थापित किया गया था और आधुनिक सिलिका जेल के बाद, पतली परत क्रोमैटोग्राफी स्थिर चरण ध्रुवीय (सिलिका से जुड़े हाइड्रॉक्सी समूह) और अधिकतम प्रतिधारण था गैर-ध्रुवीय सॉल्वैंट्स जैसे हेक्सेन | एन-हेक्सेन के साथ हासिल किया गया था। प्लेट के ऊपर ध्रुवीय यौगिकों को स्थानांतरित करने के लिए उत्तरोत्तर अधिक ध्रुवीय एलुएंट्स का उपयोग किया गया। C18 सबसे लोकप्रिय बनने के साथ विभिन्न एल्केन बंधुआ चरणों की कोशिश की गई। अल्केन श्रृंखलाओं को रासायनिक रूप से सिलिका से जोड़ा गया था, और क्षालन प्रवृत्ति का उलटा हुआ। इस प्रकार एक ध्रुवीय स्थिर सामान्य चरण क्रोमैटोग्राफी बन गया सामान्य चरण क्रोमैटोग्राफी, और गैर-ध्रुवीय स्थिर चरण क्रोमैटोग्राफी उलट-चरण क्रोमैटोग्राफी बन गई| उलटा चरण क्रोमैटोग्राफी।

उलटा-चरण
उलट चरण (जैसे जलीय मोबाइल चरण) क्षालन में, जलीय घोल का उपयोग कम ध्रुवीय स्थिर चरण के साथ मोबाइल चरण के रूप में किया जाता है। प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी में एक ही विलायक प्रणाली का उपयोग या तो सामान्य या उलटा चरण मोड में किया जा सकता है, बस स्तंभ के माध्यम से मोबाइल चरण प्रवाह की दिशा को बदलकर।

क्षालन-बाहर निकालना
EECCC शब्द का सुझाव दिए जाने से पहले CCC चिकित्सकों द्वारा रोटेशन को रोककर और स्तंभ के माध्यम से विलायक या गैस को पंप करके एक पृथक्करण प्रयोग के अंत में स्तंभ से स्थिर चरण का बाहर निकालना। रेफरेंस-एक्सट्रूज़न मोड (EECCC) में, रोटेशन को बनाए रखते हुए सिस्टम में पंप किए जा रहे चरण को स्विच करके एक निश्चित बिंदु के बाद मोबाइल चरण को बाहर निकाला जाता है। उदाहरण के लिए, यदि एक निश्चित बिंदु पर मोबाइल चरण के रूप में जलीय चरण के साथ पृथक्करण शुरू किया गया है, तो जैविक चरण को कॉलम के माध्यम से पंप किया जाता है जो स्विचिंग के समय कॉलम में मौजूद दोनों चरणों को प्रभावी ढंग से बाहर धकेलता है। प्रसार द्वारा संकल्प के नुकसान के बिना पूर्ण नमूना ध्रुवीयता (या तो सामान्य या उलट) के क्रम में eluted है। इसके लिए विलायक चरण के केवल एक स्तंभ मात्रा की आवश्यकता होती है और बाद के पृथक्करण के लिए ताजा स्थिर चरण से भरे स्तंभ को छोड़ देता है।

ग्रेडिएंट
कॉलम क्रोमैटोग्राफी में सॉल्वेंट ग्रेडिएंट का उपयोग बहुत अच्छी तरह से विकसित है लेकिन सीसीसी में कम आम है। रासायनिक ध्रुवता की एक विस्तृत श्रृंखला में इष्टतम रिज़ॉल्यूशन प्राप्त करने के लिए पृथक्करण के दौरान मोबाइल चरण की ध्रुवीयता को बढ़ाकर (या घटाकर) एक विलायक ढाल का उत्पादन किया जाता है। उदाहरण के लिए, स्थिर चरण के रूप में हेप्टेन का उपयोग करके एक मेथनॉल-पानी मोबाइल चरण ढाल को नियोजित किया जा सकता है। स्तंभ के भीतर संतुलन की स्थिति में व्यवधान द्वारा बनाए गए स्थिर चरण के अत्यधिक नुकसान के कारण, यह सभी द्विध्रुवीय विलायक प्रणालियों के साथ संभव नहीं है। ग्रेडियेंट या तो चरणों में उत्पादित किए जा सकते हैं, या लगातार।

दोहरी-मोड
दोहरे मोड में, मोबाइल और स्थिर चरणों को पृथक्करण प्रयोग के माध्यम से उल्टा कर दिया जाता है। इसके लिए स्तंभ के माध्यम से पंप किए जाने वाले चरण के साथ-साथ प्रवाह की दिशा को बदलने की आवश्यकता होती है। दोहरे मोड के संचालन से पूरे नमूने को स्तंभ से अलग करने की संभावना है लेकिन चरण और प्रवाह की दिशा को बदलकर क्षालन का क्रम बाधित हो जाता है।

दोहरी-प्रवाह
दोहरे प्रवाह, जिसे दोहरे प्रवाह के रूप में भी जाना जाता है, प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी तब होती है जब दोनों चरण स्तंभ के अंदर विपरीत दिशाओं में बह रहे होते हैं। हाइड्रोडायनामिक और हाइड्रोस्टैटिक सीसीसी दोनों के लिए दोहरे प्रवाह संचालन के लिए उपकरण उपलब्ध हैं। फोम सीसीसी के लिए 1985 में योइचिरो इटो द्वारा दोहरे प्रवाह प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी का पहली बार वर्णन किया गया था जहां गैस-तरल पृथक्करण का प्रदर्शन किया गया था। जल्द ही तरल-तरल अलगाव हुआ। प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी उपकरण को संशोधित किया जाना चाहिए ताकि कॉलम के दोनों सिरों में इनलेट और आउटलेट दोनों क्षमताएं हों। यह मोड निरंतर या अनुक्रमिक अलगाव को कॉलम के बीच में या हाइड्रोडायनामिक उपकरण में दो बॉबिन के बीच पेश किए जाने वाले नमूने के साथ समायोजित कर सकता है। आंतरायिक प्रतिधारा नामक एक तकनीक निष्कर्षण (आईसीसीई) एक अर्ध-निरंतर विधि है जहां चरणों का प्रवाह सामान्य और उलटा-चरण क्षालन के बीच अंतःस्थापित होता है ताकि स्थिर चरण भी वैकल्पिक हो।

पुनर्चक्रण और अनुक्रमिक
रीसाइक्लिंग क्रोमैटोग्राफी दोनों एचपीएलसी में प्रचलित मोड है और सीसीसी। पुनर्चक्रण क्रोमैटोग्राफी में, लक्षित यौगिकों को एल्यूट करने के बाद कॉलम में फिर से शामिल किया जाता है। कॉलम के माध्यम से प्रत्येक पास सैद्धांतिक प्लेटों की संख्या को बढ़ाता है जो यौगिक अनुभव करते हैं और क्रोमैटोग्राफिक रिज़ॉल्यूशन को बढ़ाते हैं। प्रत्यक्ष पुनर्चक्रण एक लोकतांत्रिक विलायक प्रणाली के साथ किया जाना चाहिए। इस विधा के साथ, अलगाव को सुविधाजनक बनाने के लिए eluant को उसी या एक अलग कॉलम पर चुनिंदा रूप से फिर से क्रोमैटोग्राफ किया जा सकता है। चयनात्मक पुनर्चक्रण की इस प्रक्रिया को हृदय-कट कहा गया है और विशेष रूप से चयनित लक्ष्य यौगिकों को शुद्ध करने में कुछ बलिदान हानि के साथ प्रभावी है। एक क्रोमैटोग्राफी प्रयोग से चयनित अंशों को दूसरी क्रोमैटोग्राफिक विधि के साथ फिर से अलग करने की प्रक्रिया वैज्ञानिकों द्वारा लंबे समय से प्रचलित है। पुनर्चक्रण और अनुक्रमिक क्रोमैटोग्राफी इस प्रक्रिया का एक सुव्यवस्थित संस्करण है। सीसीसी में, द्विफसिक विलायक प्रणाली की संरचना को बदलकर कॉलम की पृथक्करण विशेषताओं को संशोधित किया जा सकता है।

आयन-एक्सचेंज और पीएच-ज़ोन-रिफाइनिंग
एक पारंपरिक सीसीसी प्रयोग में उपकरण के स्थिर चरण से भरे जाने और मोबाइल चरण के साथ संतुलित होने से पहले द्विध्रुवीय विलायक प्रणाली पूर्व-संतुलित होती है। पूर्व-संतुलन के बाद दोनों चरणों को संशोधित करके एक आयन-विनिमय मोड बनाया गया है। आम तौर पर, एक आयनिक विस्थापक (या एल्यूटर) को मोबाइल चरण में जोड़ा जाता है और एक आयनिक रिटेनर को स्थिर चरण में जोड़ा जाता है। उदाहरण के लिए, जलीय मोबाइल चरण में एक विस्थापक के रूप में NaI हो सकता है और कार्बनिक स्थिर चरण को चतुर्धातुक अमोनियम नमक के साथ संशोधित किया जा सकता है जिसे कुछ 336  कहा जाता है। मोड जिसे पीएच-ज़ोन-रिफाइनिंग कहा जाता है, एक प्रकार का आयन-एक्सचेंज मोड है जो एसिड और/या बेस को विलायक संशोधक के रूप में उपयोग करता है। आमतौर पर, विश्लेषणों को उनके पीकेए मूल्यों द्वारा निर्धारित क्रम में स्पष्ट किया जाता है। उदाहरण के लिए, हेक्सेन-एथिल एसीटेट-मेथनॉल-पानी (3:7:1:9, v/v) से बना बाइफेसिक सॉल्वेंट सिस्टम के साथ जेल्सेमियम एलिगेंस स्टेम एक्सट्रैक्ट के 4.5 ग्राम नमूने से 6 ऑक्सिंडोल एल्कलॉइड अलग किए गए थे, जहां 10 एमएम ट्राइथाइलमाइन (टीईए) को ऊपरी कार्बनिक स्थिर चरण में अनुचर के रूप में और 10 मिमी हाइड्रोक्लोरिक एसिड (एचसीएल) को जलीय मोबाइल चरण में एक एल्यूटर के रूप में जोड़ा गया था। आयन-एक्सचेंज मोड जैसे कि पीएच-ज़ोन-रिफाइनिंग में जबरदस्त क्षमता है क्योंकि पृथक्करण शक्ति का त्याग किए बिना उच्च नमूना भार प्राप्त किया जा सकता है। यह आयनीकरण योग्य यौगिकों जैसे कि नाइट्रोजन युक्त अल्कलॉइड या कार्बोक्जिलिक एसिड युक्त फैटी एसिड के साथ सबसे अच्छा काम करता है।

अनुप्रयोग
विभिन्न प्रकार के रासायनिक पदार्थों को शुद्ध करने के लिए औद्योगिक और प्रयोगशाला दोनों पैमाने पर प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी और संबंधित तरल-तरल पृथक्करण तकनीकों का उपयोग किया गया है। पृथक्करण प्राप्तियों में प्रोटीन शामिल हैं, डीएनए, भांग | कैनबिडिओल (सीबीडी) भांग का पौधा से एंटीबायोटिक्स, विटामिन, प्राकृतिक उत्पाद, फार्मास्यूटिकल्स, <रेफरी नाम = समनर 2011 6107-6113> धातु आयन, रेफरी> कीटनाशक, रेफरी> एनैन्टीओमर, रेफरी> पर्यावरणीय नमूनों से पॉलीसाइक्लिक एरोमैटिक हाइड्रोकार्बन, रेफरी> सक्रिय एंजाइम, रेफरी> और कार्बन नैनोट्यूब। रेफरी>{{cite journal |last1=Zhang |first1=Min |last2=Khripin |first2=Constantine Y. |last3=Fagan |first3=Jeffrey A. |last4=McPhie |first4=Peter |last5=Ito |first5=Yoichiro |last6=Zheng |first6=Ming |title=प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी द्वारा सिंगल-वॉल कार्बन नैनोट्यूब का सिंगल-स्टेप टोटल फ्रैक्शनेशन|journal=Analytical Chemistry |volume=86 |issue=8 |year=2014 |pages=3980–3984 |doi=10.1021/ac5003189 |pmid=24673411 |pmc=4037701} प्रतिधारा क्रोमैटोग्राफी अपनी उच्च गतिशील मापनीयता के लिए जानी जाती है: इस तकनीक से मिलीग्राम से किलोग्राम मात्रा में शुद्ध रासायनिक घटकों को प्राप्त किया जा सकता है। रेफरी>{{cite journal |last1=Sutherland |first1=Ian A. |title=काउंटर-करंट क्रोमैटोग्राफी के औद्योगिक पैमाने पर हालिया प्रगति|journal=Journal of Chromatography A |volume=1151 |issue=1–2 |year=2007 |pages=6–13 |doi=10.1016/j.chroma.2007.01.143|pmid=17386930 } इसमें अघुलनशील कणों के साथ रासायनिक रूप से जटिल नमूनों को समायोजित करने का भी लाभ है।

यह भी देखें

 * क्रोमैटोग्राफी का इतिहास
 * सुपरक्रिटिकल द्रव क्रोमैटोग्राफी